标题：Zebrafish Larvae Are a Suitable Model to Investigate the Metabolic Phenotype of Drug-Induced Renal Tubular Injury

期刊：Frontiers in Pharmacology原文链接：www.frontiersin.org

摘要

药物性肾损伤（DIRI）的预防与治疗依赖于早期肾损伤敏感特异的生物标志物以及能模拟人类病理生理学的预测性动物模型的获取。本研究旨在评估斑马鱼幼体作为翻译模型在药物性肾损伤代谢组学分析中的潜力。斑马鱼幼体暴露于10%幼鱼的致死浓度（LC10）或(1/2) 庆大霉素的LC10、对乙酰氨基酚以及富马酸替诺福韦酯（TDF）和替诺福韦（TFV）形式的替诺福韦。从完整幼鱼中提取代谢物，并通过液相色谱-质谱联用法进行分析。主成分分析表明，暴露于对乙酰氨基酚、替诺福韦（TFV）和替诺福韦酯（TDF）的半数致死浓度（LC10）是数据变异的主要来源。为了确定与药物毒性作用相关的代谢物，偏最小二针对每种药物，在LC10与(1/2) LC10之间构建了判别平方分析。在(projection >1.0)中筛选出具有可变重要性的特征，并绘制维恩图以区分药物诱导性肝损伤（DIRI）的共性代谢物与药物特异性代谢物。研究确定肌酸、酪氨酸、谷氨酰胺、鸟苷、次黄嘌呤为共性代谢物，腺苷和色氨酸为对乙酰氨基酚特异性代谢物，黄嘌呤和氧化型谷胱甘肽为替诺福韦特异性代谢物。这些代谢变化与能量代谢、外源性物质解毒及蛋白质分解代谢的改变相关，而这些代谢过程均在药物诱导性肝损伤的人类病理生理学中有相关描述。由此可见，斑马鱼被证实是表征药物诱导性肝损伤相关代谢变化的适宜模型。该研究结果可为药物诱导性肝损伤的早期诊断提供参考，并有助于深化我们对药物诱导性肝损伤发病机制的认知。

关键词：转化模型、斑马鱼、代谢组学、肾小管毒性、线粒体、肾损伤生物标志物

引言

药物毒性是药物研发过程中药物淘汰的主要原因（沃林等人，2015），也是发病率和死亡率升高的主要诱因之一（皮尔穆罕默德等人，2004）。具体而言，药物诱导的肾损伤（DIRI）占所有急性肾损伤病例的19%至25%（米塔等人，2004）。肾脏是药物毒性的主要作用靶点之一，但目前用于检测肾功能的血清肌酐和血尿素氮等检测方法，对早期肾损伤的检测灵敏度不足（斯洛克姆等人，2012）。因此，开发能够补充传统生物标志物的新型筛选工具至关重要。此外，更深入地理解药物诱导肾损伤的病理生理学，对于探索可能预防或改变疾病进展的新型治疗策略也具有关键意义。

毒理学家对代谢组学的兴趣日益浓厚主要有两个主要原因。首先，代谢组学可用于寻找毒性特征，这些特征可作为诊断生物标志物，也可用于药物开发过程中的毒性预测。其次，通过识别受有毒物质影响的细胞通路，代谢组学能够加深我们对药物毒性机制的理解（布希夫德等人，2013年）。COMET和MetaMap R⃝Tox项目是毒理代谢组学作为药物毒性筛选工具潜力的两个实例。这些研究从暴露于不同有毒物质的大鼠尿液和血浆样本中构建了代谢数据库，并进一步用于预测特定器官的毒性，包括药物相关性肾损伤（埃贝尔斯等人，2007年；范·拉文茨韦等人，2012年；马特斯等人，2013年）。毒理代谢组学也被证明可用于识别新的生物标志物和/或阐明药物相关性肾损伤的潜在机制。大多数研究评估了顺铂或庆大霉素相关的肾小管毒性。受影响的常见代谢物具有范可尼综合征的特征（氨基酸、葡萄糖、磷酸盐）、三羧酸循环代谢物以及色氨酸代谢物（伦茨等人，2005年；徐等人，2008年；布登多克等人，2009年；张等人，2016年）。有趣的是，部分已识别的代谢物变化出现在血清肌酐水平改变之前，这体现了代谢组学在检测早期肾损伤方面的预测能力（波蒂利亚等人，2006年）。

大部分毒性数据是通过鼠类模型获得的。斑马鱼幼鱼是一种优质的替代动物模型，因其具备诸多优势特性，如发育迅速、体型小巧、化学物质给药简便快捷、可进行转基因操作、成本低廉且能实现高通量检测（McGrath 和 Li, 2008；Peterson 和 Macrae, 2012）。斑马鱼幼鱼用于药物诱导的肾损伤（DIRI）评估的可行性近期已得到证实。一项针对庆大霉素、对乙酰氨基酚和替诺福韦在斑马鱼幼鱼体内诱导的肾脏功能与形态变化的详细分析显示，其肾小管出现的改变与人类中报道的相似。此外，电子显微镜观察发现，肾小管线粒体受到受试药物的影响，这表明斑马鱼幼鱼体内发生了严重的代谢紊乱（Gorgulho 等人, 2018）。这些研究证据使我们提出假设：斑马鱼幼鱼是开展毒理代谢组学研究的理想模型。为验证这一假设，本研究对暴露于具有不同肾毒性机制的药物的斑马鱼幼鱼开展了一项非靶向代谢组学研究。本研究首次对斑马鱼幼鱼中药物诱导的肾小管毒性相关的代谢变化进行了全面评估。

材料与方法

伦理声明

所有涉及斑马鱼的实验程序均获古尔本基安科学研究所（IGC）伦理委员会批准，批准号为 A001.2014，符合葡萄牙兽医总局的指令（第1005/92号法令，1992年10月23日）。

斑马鱼幼鱼

我们使用了斑马鱼品系 Tg(wt1b:GFP, cdh17:GFP)；(mitfa ^{-1-})；(roy ^{-/+})，因为这一斑马鱼品系此前被用于确定致死曲线，并表征庆大霉素、对乙酰氨基酚和替诺福韦对肾小管的作用（Gorgulho 等人，2018）。不同斑马鱼品系的药物敏感性可能存在差异。因此，若使用不同的斑马鱼品系（即野生型斑马鱼），则需要更多实验动物来确定新的致死曲线并表征肾脏损伤情况。为了减少实验动物的使用数量（科学领域良好动物实验规范的“3R原则”之一），我们决定采用此前在本研究所用浓度下表现出药物诱导性肾损伤表型的斑马鱼品系。

葡萄牙里斯本诺瓦医学院的CEDOC鱼类养殖设施中饲养了三个水族箱，每个水族箱内有10条成年雄性斑马鱼和10条成年雌性斑马鱼。每周根据鱼类养殖设施的操作规程，对每个水族箱中的雌雄斑马鱼进行一次交配。胚胎在28摄氏度的标准E3溶液中培养，该溶液添加了10毫摩尔的HEPES缓冲液，直至受精后4天（dpf），此时斑马鱼的前肾已完全发育成熟（Kramer-Zucker等人，2005年）。

药物

我们测试了三种已知会对人类造成肾小管损伤，且经我们及其他研究人员证实会在斑马鱼幼鱼中引发肾损伤的药物（Hentschel 等人，2005；Peng 等人，2010；Rider 等人，2012；Cianciolo Cosentino 等人，2013；Westhoff 等人，2013；Gorgulho 等人，2018）：硫酸庆大霉素、对乙酰氨基酚（Sigma-Aldrich 公司）和替诺福韦（英国 Sequoia Research Products 公司）。替诺福韦分别以前药富马酸替诺福韦二吡呋酯（TDF）以及替诺福韦（TFV）的形式给药，其中替诺福韦是 TDF 经酯酶水解后在血液中存在的药物形式。

按可溶浓度为所有药物制备了储备液：庆大霉素 (5,000 mu g cdot mL^{-1})、对乙酰氨基酚 (12,000 mu g cdot mL^{-1})、TDF (6,000 mu g cdot mL^{-1}) 以及替诺福韦 (5,000 mu g cdot mL^{-1})。除替诺福韦外，所有药物均溶解于无菌蒸馏水中。替诺福韦则在胚胎培养基中制备。所有储备液均分装并于 -20℃ 保存，直至后续使用。

药物给药与取样

将 50 条 4 dpf 的斑马鱼幼鱼转移至六孔板的每个孔中。完全移除孔中的胚胎培养基，然后立即向每孔加入特定体积的胚胎培养基和药物储备液或药物溶剂（阴性对照），以达到所需的药物浓度（每孔总体积 = 8.75 mL）。

药物以两种不同浓度加入胚胎培养基中：LC10（在我们先前研究中与功能和/或形态损伤相关的浓度）和非致死浓度 1/2 LC10。为确认 LC10 浓度，每种药物在 10 条斑马鱼幼鱼中测试了三个接近原始 LC10 的浓度，每个浓度重复三次。新的 LC10 与我们先前文章中使用的 LC10 没有差异。按升序排列，LC10 分别为：庆大霉素 521 μM，TDF 2,676 μM，TFV 9,400 μM，扑热息痛 19,185 μM。

所有实验在连续 17 天内进行 5-10 次重复。每次实验均同时设置一个阴性对照，以检查斑马鱼幼鱼的存活率。加入每个阴性对照的药物溶剂量与相应药物储备液的体积相同。这样，阴性对照在接受与 LC10 阳性样品相同体积药物溶剂时称为 LC10 对照，在接受与 1/2 LC10 阳性样品相同体积药物溶剂时称为 1/2 LC10 对照。阴性对照的致死率始终为 0%。

药物暴露 24 小时后，丢弃死去的幼鱼，并将每个孔中的 40 条幼鱼转移至干净的微量离心管中。立即用冷水洗涤幼鱼四次，以去除药物和/或药物代谢物。之后，通过快速冷却对幼鱼实施安乐死，去除所有残留的胚胎培养基，然后迅速在液氮中冷冻以淬灭任何酶活性。共收集 83 个样本，于 -20°C 保存直至提取（具体样本量见原文）。

代谢物提取与 LC-MS 采集

提取前对样本进行随机化处理。所有样本在同一天分四批（每批 17-24 个样本）进行提取。使用甲醇:水（2:1）从整个斑马鱼幼鱼中提取代谢物。具体步骤：向每个含有 40 条幼鱼的微量离心管中加入 350 μL 冷的甲醇:水（2:1），涡旋 3 分钟，4°C 超声 15 分钟以增强代谢物提取，然后最大转速离心 10 分钟，将 140 μL 上清液转移至新的微量离心管中进行真空干燥。干燥后的样品用 70 μL 水复溶。从每个复溶样品中取 10 μL 混合成质控（QC）池，在整个样品采集过程中穿插进样，以检查 LC-MS 的性能。将 55 μL 每个样品或 QC 池注入 RPLC-Q-TOF 系统进行分析。详细方法见参考文献。

LC-MS 数据预处理

对 83 个样本和 12 个 QC 池的原始数据进行保留时间对齐、峰拾取、峰匹配、过滤和归一化。保留时间对齐使用 msalign 包（质量误差 5 ppm）。峰拾取和峰匹配使用 XCMS 包。最终保留那些在 QC 池中相对标准偏差 ≤ 0.3 的特征。最终列表包含 445 个特征。数据通过总峰面积归一化，然后进行概率商归一化。统计分析前对数据进行中心化和单位方差缩放。

外源性化合物的排除

在色谱图中可以清楚看到外源性化合物（HEPES 和药物相关化合物）的信号。采用以下策略从 445 个特征列表中排除这些信号：（1）排除那些与 HEPES 和药物相关化合物的理论 m/z 及同位素模式匹配的离子；（2）排除那些与第一步中排除的特征高度相关（相关系数 ≥ 0.9）的特征。第二步确保从 445 个特征列表中完全排除所有外源性化合物的加合物、碎片和同位素。

统计分析

使用 R 软件进行主成分分析。使用 SIMCA 12+ 软件包通过偏最小二乘判别分析选择药物毒性的分类器。

代谢物鉴定

代谢物鉴定按照最低报告标准指南进行。使用 Data Analysis 软件中的 Smart Formula 工具，基于精确质量（质量误差 < 5 ppm）和同位素分布（sigma 值 < 20）进行初始离子注释。结果与在线代谢组学数据库（METLIN、人类代谢组数据库、MassBank）进行匹配。通过目标代谢物信号最强样本的 MS-MS 实验和参考标准品进行确认。

结果

数据质量

在完成LC-MS数据预处理后，代谢组学实验的第一步是分析数据质量。该步骤会检查与样本采集、代谢物提取或样本进样等相关的分析因素是否对代谢谱产生影响。主成分分析（PCA）是解决这一问题的极有用方法，因为它能以无偏的方式识别导致样本间主要差异的变量。因此，我们基于所有样本以及在整个数据采集过程中重复进样的质控（QC）样本池构建了PCA模型（图1A）。质控样本池的聚类结果表明，各质控样本池之间不存在代谢物差异，从而证明了液相色谱-质谱联用仪的性能良好。主成分分析的前两个主成分涵盖了数据中59%的方差。

随后，在不包含质控混合样本的情况下构建了主成分分析（PCA）模型，以探究另外两个分析因素的影响：色谱柱和代谢物提取。本研究的液相色谱（LC）方法采用两根分析柱交替工作以加快数据采集速度（Nevedomskaya 等人，2011；Pacchiarotta 等人，2012）。因此，色谱柱之间的潜在差异可能会对数据产生影响。关于代谢物提取，由于样本被分为四组或四个提取批次，有必要检查这些批次之间是否存在代谢差异。新构建的PCA模型的前两个主成分解释了数据中60%的变异。得分图根据色谱柱或提取批次进行着色。色谱柱未对样本分布产生影响（图1B）。然而，提取批次具有显著影响：第一批提取的样本与第四批提取的样本分布相距较远（图1C）。

提取模块的影响可能会干扰药物对代谢特征的作用，这也是本研究的研究目的。因此，本研究采用了以下策略来对考虑到并非所有变量都受到同等影响，且所有不同条件（药物及浓度）均存在于所有提取模块中，分析了提取模块的影响。针对每个变量，分别计算了每个提取模块的平均值（模块均值）和总平均值（整体均值）。随后，以模块均值与整体均值的商计算校正因子。按照此方法，每个变量（以及每个提取模块）的校正因子均不相同。应用校正因子后，提取操作的影响在主成分分析中已不可见（图1D）。前两个主成分解释了数据54%的方差。

图1 | 数据质量。(A) 所分析的95个样本（斑马鱼样本、(n=83) 3、质控混合样本、(n=12)）的主成分分析得分图。前两个主成分分别解释了数据47%和12%的变异。(B) 83个斑马鱼样本的主成分分析得分图，展示了色谱柱的影响。前两个主成分分别解释了数据48%和12%的变异。(C) 83个斑马鱼样本的主成分分析得分图，展示了萃取模块的影响。(D) 校正萃取模块影响后的主成分分析得分图。前两个主成分分别解释了数据46%和8%的变异。

药物和浓度对代谢谱的影响

为了评估药物是否对代谢谱产生影响，根据药物种类和浓度对代表83个样本的先前PCA得分图进行了表征。无论是否校正提取过程的影响，PCA分析均显示出药物的显著效应（图2A、B）。斑马鱼暴露于对乙酰氨基酚 LC10、(1/2) LC10 以及替诺福韦酯 LC10 的幼鱼而替诺福韦低浓度组则与阴性对照组相距甚远，而庆大霉素LC10和(1/2)LC10、TDF(1/2)LC10和TFV(1/2)LC10 与阴性对照接近。这种分布反映了主成分分析（PCA）中存在浓度依赖性效应：最低浓度浓度，分别对应 (1/2) 庆大霉素的 LC10 和 LC10 以及 (1/2) 替诺福韦的 LC10，是与阴性对照组。只有浓度高于2676微摩尔（即替诺福韦的最低效应浓度10）的样本，与阴性对照组相比呈现出不同的代谢特征。这一规则的唯一例外是替诺福韦的最低效应浓度10为4700微摩尔，其代谢特征与阴性对照组相近。

在主成分分析的得分图中观察到的另一个有趣现象是，TDF LC10 和 TFV LC10 同时出现且与对乙酰氨基酚分离，这能够反映出两个簇之间药物相关化合物的差异。

下一步是从445个特征中剔除所有外源性化合物。共剔除22个特征，其质荷比（m/z）对应于HEPES和药物相关化合物（补充表S1）。图2C展示了剔除这些变量后构建的主成分分析（PCA）模型的得分图。与图2B一致，仅暴露于LC10的样本与阴性对照相比表现出不同的代谢特征替诺福韦、低浓度替诺福韦、(1/2) 低浓度对乙酰氨基酚以及低浓度对乙酰氨基酚。一个非常有趣的变化是，对乙酰氨基酚与泰诺福韦二吡呋酯、泰诺福韦之间的差异已不再明显。此外，与阴性对照组归为一类的样本群表现出了更高的异质性。

药物毒性的代谢标志物

主成分分析表明，对乙酰氨基酚、替诺福韦富马酸酯和替诺福韦的毒性浓度对代谢谱产生了显著影响（图2A–C）。为了识别与药物毒性作用相关的代谢物，本研究以处理组为响应变量（Y变量）构建了偏最小二乘判别分析模型。在……之间构建了配对偏最小二乘判别分析模型阴性对照组以及(1/2) LC10、阴性对照组以及LC10和每种药物的LC10以及(1/2) LC10。选择该方法是因为两类 PLS-DA 模型的解释比多类模型更简单。正如在主成分分析（PCA）中所观察到的，庆大霉素 PLS-DA 模型未能显示出阴性样本之间的任何分离对照组、庆大霉素LC10或庆大霉素(1/2) LC10之间存在任何分离，因此我们决定将庆大霉素样本从其余分析中排除（补充表S2和补充图S1）。

图2 | 药物及浓度对代谢谱的影响。对83个斑马鱼样本进行主成分分析的得分图，未（A）和已（B）校正提取批次效应，展示了药物和浓度的影响。（C）对83个斑马鱼样本校正提取批次效应并排除外源性化合物效应后进行主成分分析的得分图，展示了药物和浓度的影响。LC10，10%斑马鱼幼鱼的致死浓度；TDF，富马酸替诺福韦酯；TFV，替诺福韦。

为了揭示导致药物产生毒性作用的代谢物，我们选择了以下两者之间的PLS-DA模型LC10 与 (1/2) 对应的 LC10，因为只有这组模型能够区分与LC10相关的毒性作用在我们之前的研究中，以及在本研究中被视为无毒的(1/2) LC10的非致死效应在本研究中被视为无毒。从这三种中的每一种针对LC10与(1/2) LC10的PLS-DA模型，我们筛选出了这些模型在第一个主成分上，结合投影变量重要性（VIP）为(value >1.0)的特征，该主成分负责样本的分组区分（对乙酰氨基酚对应(n=188)，替诺福韦二吡呋酯对应222，替诺福韦对应249）。为区分与药物毒性相关的共性代谢物和药物特异性代谢物，我们利用筛选出的特征构建了维恩图。三种药物共有的特征有119个，对乙酰氨基酚、替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦的特异性特征分别为23个、25个和30个。成功完成了9种代谢物的化合物鉴定：鸟苷、次黄嘌呤、肌酸、谷氨酰胺和酪氨酸为共性代谢物，腺苷和色氨酸为对乙酰氨基酚毒性特异性代谢物，黄嘌呤和谷胱甘肽二硫化物为替诺福韦毒性特异性代谢物（补充表S3和补充图S2）。除谷胱甘肽二硫化物外，其余所有代谢物在暴露于LC10浓度的斑马鱼体内的浓度均高于暴露于(1/2) LC10浓度的斑马鱼（图3和补充图S2）。

讨论

本研究首次详细评估了斑马鱼幼鱼中药物诱导的肾小管损伤相关的代谢变化。

出于实际原因，我们的实验是在完整幼鱼上进行的，而非分离的肾单位。因此，我们无法将观察到的代谢变化完全归因于肾小管。即便所有测试药物都作用于肾小管，它们也可能对其他器官造成损伤（例如，对乙酰氨基酚已知会引发肝毒性）。这种可能存在的非肾毒性并不会削弱本研究方法的效力。事实上，肾脏在生物体的代谢调节中发挥着关键作用，它控制着代谢废物的排泄、机体pH值、细胞外体积以及激素的生成与分泌。因此，即便在极早期阶段，肾损伤不仅可能引发器官特异性的代谢变化，还会导致全身性代谢改变（Lane等人，2013年）。这些全身性代谢变化和/或与非肾毒性相关的代谢变化，也可能对药物诱导的肾损伤（DIRI）产生影响。从这个角度来看，我们这种反映整个生物体真实状况的研究方法，在作为药物诱导肾损伤转化模型方面似乎更具有效性。

本研究揭示了暴露于肾小管环境后嘌呤、谷胱甘肽和氨基酸的代谢物变化神经毒性物质。在暴露于与肾小管损伤相关的不同药物的大鼠血浆和肾组织中也发现了类似的变化（Boudonck 等人, 2009; Zgoda-Pols 等人, 2011; Mattes 等人, 2013）。这些代谢变化可能与能量代谢、异生物质代谢和蛋白质分解代谢的改变有关，这些改变在急性肾损伤的病理生理学中已有相关描述（Druml, 2013）。

近端小管细胞依赖氧化磷酸化来满足基底侧 (Na^{+} / K^{+}) ATP 酶在葡萄糖和离子重吸收过程中的能量需求（Basile 等人，2012）。本文所用的药物已被证实可在斑马鱼幼鱼中诱导肾小管线粒体肿胀和/或嵴断裂（Gorgulho 等人，2018），这些迹象可能与 ATP 合成的功能性抑制相关（Galloway 和 Yoon，2012）。随之而来的 ATP 消耗增加与 GTP 耗竭同步发生（Dagher，2000），这或许可以解释嘌呤核苷酸降解产物（腺苷、鸟苷、次黄嘌呤和黄嘌呤）水平升高的现象。此外，ATP 耗竭可能激活磷酸肌酸的肾脏能量储备。磷酸肌酸作为能量来源，可促进 ATP 的循环再生（Wyss 和 Kaddurah-Daouk，2000），这与观察到的肌酸水平升高现象相符。

另一方面，氧化磷酸化的抑制还会导致活性氧的爆发（Adam-Vizi 和 Chinopoulos，2006）以及抗氧化防御系统的消耗。研究观察到氧化型谷胱甘肽含量下降，这可能表明谷胱甘肽合成减少（Santangelo 等，2004；Shang 等，2016），或是与高反应性化合物的结合反应增强（Wang 和 Ballatori，1998）。

最后，急性肾损伤的主要代谢改变之一是蛋白质分解代谢的激活，导致骨骼肌中氨基酸的过量释放（Flügel-Link 等人，1983）。这或许可以解释本研究中部分氨基酸（谷氨酰胺、酪氨酸和色氨酸）含量升高的现象。除庆大霉素外。暴露于LC10和(1/2)的斑马鱼庆大霉素半数致死浓度10的代谢特征与未处理的幼体一致。在我们之前的研究中，暴露于庆大霉素半数致死浓度10的斑马鱼出现了肾脏改变，包括菊粉清除率下降以及线粒体形态改变（戈尔古略等，2018）。然而，我们发现难以在斑马鱼幼体中检测到庆大霉素，实际上，暴露于庆大霉素或水的完整幼体的色谱图看起来完全相同（戈尔古略等，2018）。在本研究中，除了仪器方面的原因外，我们没有其他解释来说明这一结果，但我们认为有必要对此进行报告。

替诺福韦是对代谢变化影响最弱的药物。这可以用替诺福韦（TFV）的生物利用度低于其前药替诺福韦酯（TDF）来解释（Shaw 等人，1997年）。替诺福韦的低亲脂性意味着需要服用更高剂量要达到相似的血液浓度，TFV 的浓度需要高于 TDF。

图3 | 经PLS-DA模型分析后鉴定出的代谢物箱线图。肌酸、谷氨酰胺、鸟苷、次黄嘌呤和酪氨酸与对乙酰氨基酚、替诺福韦酯和替诺福韦的肾小管毒性相关。腺苷和色氨酸与对乙酰氨基酚的肾小管毒性相关。黄嘌呤和二硫化谷胱甘肽与替诺福韦的肾小管毒性相关。LC10为斑马鱼幼鱼10%致死浓度；C为对照组，G为庆大霉素；P为对乙酰氨基酚；TDF为富马酸替诺福韦酯；TFV为替诺福韦。

结论

本研究证实了斑马鱼幼鱼在表征与肾小管毒性药物相关的代谢变化方面的实用性。研究发现，嘌呤代谢物、氧化型谷胱甘肽和氨基酸与对乙酰氨基酚和/或替诺福韦的毒性作用相关。这些代谢物与肾小管损伤的病理生理机制相关，主要影响线粒体，或可用于药物诱导性肾损伤（DIRI）的早期诊断、深入探究其潜在机制，以及筛选肾保护化合物。