AP4K4蛋白功能的丧失会导致人类和斑马鱼出现先天性异常

题目：Zebrafish (Danio rerio) Is an Economical and Efficient Animal Model for Screening Potential Anti-cataract Compounds

原文链接:https://doi.org/10.1167/tvst.11.8.21

期刊:Translational Vision Science & Technology (TVST)

关键词： 抗白内障化合物；白内障；羊毛甾醇；斑马鱼；斑马鱼动物模型

引用： Liu CF, Ou-Yang Y, Huang CY, Jao SW, Kuo YK, Chen HC, Cheng SC, Wang NK, Chuang LH, Chen YH, Chen WY. 斑马鱼（Danio rerio）是一种用于筛选潜在抗白内障化合物的经济高效的动物模型。Transl Vis Sci Technol. 2022;11(8):21, https://doi.org/10.1167/tvst.11.8.21

目的： 开发一种用于筛选潜在抗白内障化合物的斑马鱼白内障模型。

方法：将活体斑马鱼麻醉后，以3250 ~mJ / cm{2} / d的剂量进行紫外线-C（UV-C）照射，直至其出现严重白内障。通过ImageQuant TL 7.0版软件分析照片，对这些白内障进行分级。选取患有严重白内障的斑马鱼，评估多种化合物的白内障治疗效果，包括此前已证实有效的候选化合物羊毛甾醇。初步评估中，将斑马鱼分为四组：不治疗组、平衡盐溶液组、β-环糊精组beta -CD）以及溶解于β-环糊精的羊毛甾醇组。各组均进行10天处理，随后评估晶状体的透明度。为评估治疗效果的持续性，先对斑马鱼分别用β-环糊精和溶解于β-环糊精的羊毛甾醇连续处理7天，再在不进行任何处理的情况下监测3天。

结果： 使用本UV-C照射方案，斑马鱼发展为严重白内障的平均时间为7.8天（范围4-15天）。两种研究设计仅需另外10天即可确定待测化合物的效果。整个实验周期可在一个月内完成，且整个实验过程经济实惠。

结论： 使用这种新开发的斑马鱼白内障模型，我们可以以合理的成本和较短的时间检测大量待测化合物。这些检测方法可能有助于开发一个筛选潜在抗白内障化合物的高效平台。

转化相关性： 经过进一步的实验和研究，这些结果可能有助于开发用于人类的抗白内障药物。

引言

损害视力的白内障几个世纪以来一直是一个重大的全球性问题。据估计未来20年，白内障患者数量将增加约三分之一，且白内障仍将是全球所有地区视力损伤的首要病因。用于筛选抗白内障药物的斑马鱼模型蛋白质聚集是白内障发生发展的最重要因素。蛋白质聚集可由多种原因诱导，包括晶状体蛋白突变（这是先天性白内障的主要原因）以及氧化应激（这是年龄相关性白内障的主要诱因）。然而，晶状体蛋白维持透明或导致混浊的确切调控机制尚未完全阐明。已被阐明。此外，目前仍没有任何化合物目前临床上尚无治疗白内障的有效药物；手术治疗仍是唯一有效的方法，不过该方法可能引发并发症，进而导致失明以及一些术后护理问题。因此，发现一种能有效治疗白内障的化合物将提高患者的安全性。

近期一项研究表明，羊毛甾醇这一种化合物可在体内降低犬类白内障的严重程度，并在体外提升兔摘除的白内障晶状体的透明度¹⁰；而另一项研究则显示，化合物可在携带R49CαA晶体蛋白和R120GαB晶体蛋白的遗传性白内障小鼠模型中改善晶状体透明度。化合物29处理还能在体内部分恢复老年小鼠晶状体中晶体蛋白的溶解度，也能在体外恢复人类晶状体中晶体蛋白的溶解度⁴。尽管这些实验模型为测试抗白内障化合物提供了有价值的工具，但它们成本高昂、耗时长久，且大多数实验室掌握相关技术的门槛较高¹¹。因此，开发一种成本效益高的动物模型用于抗白内障化合物的研发具有重要的临床价值。

将斑马鱼作为动物模型的优势在于，能够便捷地筛选大量化合物和药物，以探究其在阿尔茨海默病、代谢紊乱等人类疾病中的治疗潜力。 此外，斑马鱼还被专门用于模拟人类的多种眼部疾病，包括先天性白内障、近视、青光眼、糖尿病性视网膜病变以及衰老相关疾病相关的黄斑变性。 然而，目前目前尚无关于诱导斑马鱼白内障或评估候选化合物的标准化方案。因此，我们建立了一套经济且省时的方案，用于构建斑马鱼白内障模型以筛选抗白内障化合物。

材料与方法

斑马鱼白内障模型

该动物实验经中国台湾省淡水镇淡江大学动物伦理审查委员会批准（批准号：108001）。白内障被诱发通过紫外线C（UV-C）照射诱导斑马鱼患白内障的方法如下。斑马鱼AB品系按先前所述的方法，在28.5℃、14小时光照/10小时黑暗的光周期下饲养¹⁹²⁰。受精后90天，选取体重360至440毫克的3月龄健康斑马鱼进行实验。斑马鱼先用150 ppm三卡因（美国密苏里州圣路易斯市Sigma-Aldrich公司产品）麻醉诱导，实验开始前维持在50 ppm三卡因浓度下麻醉²¹²²。首先使用ProCam应用程序（版本11.4.7；美国加利福尼亚州洛杉矶市Samer Azzam开发），通过专用放大镜和iPhone 7手机内置摄像头对斑马鱼进行拍摄，拍摄参数设置固定（补充图S1A、S1B）。将斑马鱼右眼置于紫外线交联仪（美国纽约州韦斯特伯里市Spectroline公司产品）中，以254 nm的UV-C、3250 ~mJ / cm{2} / d的剂量进行照射，直至观察到3级白内障（具体操作流程见补充图S2）。由经验丰富的眼科医生（刘CF）在每日拍摄照片时，通过放大镜检测白内障的发生发展情况。UV-C照射结束后，将斑马鱼置于暗水箱中60分钟以从麻醉状态中恢复。

上述视觉分级最初仅用于筛查重度白内障。对照片中视觉分级为3级的白内障灰度进行了进一步分析，使用的是ImageQuant TL软件（7.0版；美国伊利诺伊州芝加哥市通用医疗保健公司）。ImageQuant TL的客观灰度值范围为0至255；数值越高，单位面积内的黑色像素数量越多，表明晶状体的透明度越高。反之，数值越低，单位面积内的黑色像素数量越少，提示白内障病情越严重。实验晶状体的统计分析结果被用于评估不同溶液的治疗效果。该分析方法与体外猪晶状体浸泡实验法类似，相关内容详见补充文件。

在ImageQuant TL分析中灰度值小于150的斑马鱼被选入下一轮化合物处理实验。在实验第一阶段，我们将斑马鱼分为四组来评估化合物对白内障的治疗效果：无药物组（ND）、平衡盐溶液组（BSS）、溶于BSS的β-环糊精组（β-CD）以及溶于BSS中β-CD的羊毛甾醇组。通过每天两次在斑马鱼右眼角膜上放置浸润化合物的海绵并持续10天（每次5分钟）进行处理（详细方案见图1B图例说明），实验结果总结于图1C、1D和1E中。在实验第二阶段，为评估命中化合物处理效果的持续性，选取白内障且灰度值scale <150 每天接受两次指定化合物处理，连续处理七天，随后在无任何处理的情况下连续三天评估灰度变化。结果总结于图2B中。为满足动物伦理护理与保护的要求，我们提前开发了体外和离体测试化合物的方法，体外浊度清除试验以及离体猪晶状体浸泡试验的详细方法均在补充文件中进行了说明。

图1.组成性羊毛甾醇处理逆转斑马鱼白内障。（A，B）使用斑马鱼的实验程序示意图。（C，D和E）实验结果示意图。（A）用254 nm UV-C照射斑马鱼的镜片，剂量为3250 mJ/c3250 ~mJ / cm{2} /d，照射7天，诱发白内障。（B）白内障诱导后，将白内障表型严重的鱼分为四个处理组，如下：无药物、BSS、β-CD、β-CD中的羊毛甾醇（LS）。镜片用compound-infiltrated海绵覆盖5分钟，每天两次，共10天。使用用于白内障诱导的相同方法对斑马鱼进行麻醉和拍照。在5-μL滴注预期化合物后，将浸润有预期化合物的5×5mm海绵涂抹在右眼上。五分钟后，将斑马鱼置于深色水箱中60分钟，以从麻醉中恢复。（C）实验中鱼的镜片灰度量化。结果表示为均值±均方差。灰度255表示完全透明，而0表示完全不透明。实验开始时未处理左眼的平均灰度为241，该值在整个实验过程中保持稳定。星号表示ND与其他组之间的显着差异（P<0.05)，独立t检验）。（D）使用指示化合物治疗七天后灰度的变化。镜片的详细灰度和样品编号总结在补充表S1至S4中。**P<0.05，独立t检验。（E）β-CD中无药物、BSS、β-CD或LS处理的第10天斑马鱼镜片的图像。

图2. 羊毛甾醇处理停止后，处理效果可持续三天。(A) 白内障诱导及羊毛甾醇处理的示意图。患有严重白内障的斑马鱼经β-环糊精和羊毛甾醇（LS）处理7天，随后停止处理观察三天。(B) 斑马鱼晶状体的灰度值。结果以平均值±标准差表示。晶状体灰度值和样本数量的详细信息汇总于补充表S5和S6。**P<0.05，独立t检验。

结果

兰那固醇处理可在斑马鱼模型中实现成本效益显著的白内障逆转

为了在体内研究羊毛甾醇的抗白内障作用，我们建立了一种利用斑马鱼的动物白内障模型，该模型具有经济、省时且可重复的特点。如图1A和图1B所示，通过将斑马鱼的右眼暴露于UV-C辐射下，可诱导斑马鱼患上严重白内障，灰度值为<150。3250 ~mJ / cm{3} /d连续七天。斑马鱼的左眼未进行处理，以维持其视力，并作为白内障眼的对照。这种白内障诱导处理对斑马鱼造成了一定损伤，因为实验结束时斑马鱼的死亡率约为20%（补充图S3）。为了评估该斑马鱼白内障模型在筛选抗白内障化合物方面的适用性，我们采用羊毛甾醇开展了以下两组连续实验。

阶段一：利用斑马鱼白内障模型验证羊毛甾醇的抗白内障功效

为研究抗白内障化合物是否能逆转斑马鱼白内障，我们选取患有严重白内障的斑马鱼（灰度值 <150）和羊毛甾醇（图1B）开展实验。将斑马鱼分为四个处理组：β-环糊精与平衡盐溶液中的羊毛甾醇组、平衡盐溶液中的β-环糊精组、平衡盐溶液组以及正常饮食组（图1B）。每组包含15只患有白内障的斑马鱼，连续处理10天。表1总结了各组斑马鱼的人口统计学特征，组间均未出现显著差异。补充表S1至S4列出了治疗期间白内障的灰度值。结果显示在图1C中，所有灰度值均以时间依赖性方式逐渐升高，这可能与鱼体的自我修复有关。有趣的是，经羊毛甾醇处理的晶状体在实验结束时灰度值出现了显著更大幅度的升高，表明其抗白内障效果得到增强。为对比自我修复和羊毛甾醇处理所引发的灰度升高幅度，我们计算了第0天与第7天的灰度差值。如图1D所示，经羊毛甾醇处理的晶状体灰度值升高了69.6，而正常饮食（ND）组、平衡盐溶液（BSS）组和β-环糊精（β-CD）组的灰度值仅升高了by <50。尽管羊毛甾醇无法完全逆转斑马鱼白内障的发展进程至透明状态，但大多数经羊毛甾醇处理的晶状体在实验结束时均呈现出scale >200的灰度表现（图1C和图1E）。

表1. 第一阶段实验前斑马鱼的人口学及眼部数据

结果以平均值±标准差（mean±SD）表示。a 瞳孔宽度使用体视显微镜（MZ9；Leica，德国威茨拉尔）内置标尺测量。b 晶状体宽度使用光学显微镜（XL-1000；Leica）内置标尺测量。c 白内障诱导后测量基线灰度值。d 性别采用费希尔精确检验分析，其余指标采用单因素方差分析。

表2. 第二阶段实验前斑马鱼的人口学及眼部数据

结果以均数±标准差（mean ± SD）表示。a基线灰度在白内障诱导后测量。b性别采用Fisher精确检验分析，其余指标采用独立样本t检验分析。

阶段2：羊毛甾醇在斑马鱼白内障模型中延长的抗白内障作用

基于上述为期10天的实验，羊毛甾醇处理在体内的抗白内障活性优于其他处理方式。为进一步评估该效应的持续时间，我们开展了一项实验，即在斑马鱼接受7天处理后不再给予任何化合物干预，同时延长对晶状体灰度的监测时长（图2A）。在该实验中，斑马鱼晶状体的基线人口学特征和眼部表型在各项指标上均未表现出组间显著差异（表2）。结果总结于图2B。与前述结果一致，从第3天至第7天，羊毛甾醇的抗白内障效应显著高于溶剂对照组（处理干预阶段，补充图S4），且这一差异从第8天持续到第10天（未给药组，补充图S4）。对于羊毛甾醇和β-环糊精，晶状体的详细测量数据分别见于补充表S5和补充表S6。

图3. 羊毛甾醇提高提取的猪晶状体蛋白在体外的清除速率。(A) 不同浓度羊毛甾醇对提取的猪晶状体蛋白影响的浊度清除实验。每20分钟监测一次浊度，共监测20小时。图中展示了指数回归曲线（实线）。O.D. 为光密度。(B) (A) 中指数回归曲线的方程及参数。(y0 = 剩余量，a = 可清除面积，b = 清除速率，exp = 指数，x= time。

羊毛甾醇在体外恢复了含提取猪晶状体蛋白溶液的透明度

为了测试羊毛甾醇的抗白内障效果，研究人员采用亚硒酸钠和晶状体蛋白溶液开展了体外浊度清除实验。具体实验方法详见补充文件（体外浊度清除实验）。亚硒酸钠处理组样品的平均吸光度达到0.528（测定波长405纳米），表明实验成功白内障模拟实验。值得注意的是，羊毛甾醇处理使晶状体溶液的浊度呈时间依赖性降低（图3A）。此外，回归分析显示，羊毛甾醇诱导的清除速率呈剂量依赖性，在1毫摩尔羊毛甾醇浓度下达到饱和（图3B）。正如预期的那样，本研究结果验证了羊毛甾醇在体外的抗白内障功能，并促使我们进一步利用生理样本检测其功能。

羊毛甾醇逆转离体猪晶状体的透明度

为了在更接近生理状态的环境下测试羊毛甾醇的抗白内障功效，我们采用新鲜猪晶状体作为实验材料，通过将晶状体置于刘-饶（JL）溶液（0.05克[乙二胺四]）中孵育的方式诱导其产生白内障。[三乙酸二钠+平衡盐溶液定容至50毫升]，随后用含羊毛甾醇或不含羊毛甾醇的β-环糊精处理（图4A）。具体方法见补充文件（体外猪晶状体浸泡实验）。利用ImageQuant TL软件分析照片中猪晶状体的灰度值，以此确定白内障严重程度：灰度值越高表示透明度越高，反之亦然。值得注意的是，我们观察到在JL溶液中孵育会使晶状体膨胀，且JL溶液组的大多数晶状体在2天后因渗透压失衡而破裂。不过，未对JL溶液组的晶状体进行灰度分析并不影响其他组之间的对比。此外，尽管所有组在处理第2天时灰度值均显著下降，猪晶状体的收缩可能会对白内障严重程度产生影响（图4B），但不同化合物处理后的猪晶状体宽度并无差异（补充表S7）。

图4. 羊毛甾醇逆转离体猪晶状体透明度的丧失。(A) 浸泡实验示意图。将分离的猪晶状体用Jao-Liu（JL）溶液处理两天，随后在含空白溶剂β-环糊精以及β-环糊精溶液中的羊毛甾醇（LS）中培养八天。每两天测定一次晶状体的透明度。详细的基线和处理数据总结于补充表S7。(B) 猪晶状体的灰度定量分析。结果以平均值±标准差表示。详细灰度值和样本数量总结于补充表S8和S9。* *P<0.05，独立t检验。

将晶状体浸泡在含羊毛甾醇的缓冲液中六天，与置于载体对照β-溶液中的晶状体相比，其白内障透明度得到了显著恢复CD。羊毛甾醇处理组晶状体的灰度值在实验结束前均显著改善（图4B），而溶剂对照组晶状体的灰度值在处理第2天至第4天期间略有上升（图4B）。

尽管我们无法完全治愈离体猪晶状体的白内障，但研究结果有力表明，羊毛甾醇处理确实对促进体外诱导白内障猪晶状体的透明度恢复具有作用P=0.026，第8天，补充表S8）。

新型斑马鱼白内障模型可作为抗白内障化合物经济高效的筛选平台

本研究建立的斑马鱼白内障模型具有高效的白内障诱导方案，可快速验证抗白内障化合物。斑马鱼白内障模型、浊度清除实验和晶状体浸泡实验所用设备的价格列于表3。实验动物的成本用于这种新开发的斑马鱼白内障模型进行抗白内障化合物测试的化学品成本非常低（约120美元，包括30只斑马鱼组[15只用于测试新化合物，其余作为对照]、3个培养皿、0.15克三卡因和1克羊毛甾醇）。此外，所提出的检测方法耗时相对较短，可在一个月内完成整个实验流程。

表3. 本研究中设备及废弃物相关成本

所有费用均以新台币（NTD）计价，并按1美元兑换30新台币的汇率换算为美元（USD）。EDTA 即乙二胺四乙酸。

讨论

在本研究中，我们使用羊毛甾醇验证了新建立的斑马鱼动物模型用于抗白内障实验的有效性。为满足动物伦理饲养与保护的相关要求，我们探究了羊毛甾醇的作用采用体外和外植体两种方法筛选一线抗白内障化合物的特罗尔。体内实验分为两个阶段。第一阶段，连续10天给予羊毛甾醇处理，斑马鱼白内障模型造模成功（图1）。第二阶段，治疗结束后，羊毛甾醇的治疗效果仍持续存在（图2）。本研究中的浊度清除实验也证实了羊毛甾醇具有时间和剂量依赖性的白内障清除作用（图3）。此外，实验结果显示，在浸泡实验中，羊毛甾醇可显著逆转猪晶状体透明度的下降（图4）。这一系列实验以羊毛甾醇为阳性对照，提供了一种在一个月内验证抗白内障化合物的高性价比方法。

相比之下，其他用于药物筛选的动物模型需要更高的成本和更多的时间。基因工程小鼠模型可能需要超过基因编辑需要一年时间，而后续诱发白内障以及复合检测可能还需要再耗时6个月。例如，携带R120G cryAB敲入基因的小鼠在约20周龄时出现晶状体混浊，随后还需要两周时间完成复合测试。 相比之下，总实验时间我们新开发的斑马鱼白内障模型所需时间不足一个月，还能在短时间内对大量样本进行评估。赵等人¹⁰采用解剖后的兔晶状体进行体外实验、犬晶状体进行体内实验，在这些动物身上进行化合物测试成本极高、耗时漫长，还存在伦理问题。而我们利用猪晶状体和斑马鱼白内障模型开发的检测方法，成本相对更低、效率更高，且学习曲线更平缓。此外，斑马鱼作为非哺乳动物，是药物安全性临床前评估和治疗效果评估的合适动物模型，几乎不存在动物伦理方面的顾虑。这些特性使斑马鱼成为一个实用的药物筛选平台，也可应用于化合物筛选。优化。

给药途径也是白内障治疗的一个问题。在之前一项评估羊毛甾醇体内治疗白内障效果的研究中，研究人员给狗进行了玻璃体内注射羊毛甾醇¹⁰。然而，这种治疗方式过于不便，无法改善白内障患者的生活质量，且还存在一些潜在风险²⁴，这可能会限制羊毛甾醇在人类身上的应用；而使用局部滴眼液会是更好的解决方案。羊毛甾醇是一种四环三萜类化合物，是胆固醇合成途径的中间产物。尽管我们未测定羊毛甾醇的角膜穿透性，但我们推测其与醋酸泼尼松龙的角膜穿透性相近，醋酸泼尼松龙同样是一种亲脂性的甾醇类化合物，其角膜通透性为3.3×10⁻⁵厘米/秒，能够轻松穿透角膜上皮、基质和内皮²⁵,²⁶。我们还使用了β-环糊精来增强羊毛甾醇的渗透。 该化合物是由于具有增强药物溶解性、提高生物利用度和改善制剂稳定性的特性，该物质可用于制药领域，还能掩盖药物的刺激性作用，因此被普遍认为是安全的。我们进一步将渗透了该物质的海绵应用于鱼的角膜（图1B和图2A）。结果显示，羊毛甾醇处理可逆转晶状体混浊（图1C和图2B）。局部使用羊毛甾醇更有可能获得美国食品药品监督管理局批准用于人类白内障治疗。此外，若发现相关或其他候选药物，我们的平台也可用于对这些药物进行快速且经济高效的验证。

先前的一项研究表明，羊毛甾醇是治疗白内障的有效药物¹⁰。然而，该研究并未探究停药后药理作用持续的时长。由于斑马鱼实验中的死亡率在第7天后有所上升（补充图S3），我们在第二阶段实验中将治疗时长设定为7天，以更好地保证样本数量。此外，在第一阶段实验中，我们观察到第10天后斑马鱼瞳孔的ImageQuant TL尺寸缩小至750个单位以下，这可能会给测量和分析带来困难。因此，实验于第10天终止。我们还发现，局部治疗的白内障清除效果在7天治疗结束后立即消失（观察期的灰度值增幅小于治疗期）。但两组之间的差异依然存在。这可能意味着，对已接受治疗的白内障所产生的作用或许会持续一段时间。最合适的治疗时长以及复发问题仍需进一步研究。

在利用斑马鱼白内障模型开展的一期实验中，所有组的灰度值在第7天后均出现波动；这可能是由于瞳孔收缩引发的测量偏差所致。瞳孔收缩可能是因UV-C照射损伤悬韧带，导致晶状体向后下沉引起的。此外，持续实验给斑马鱼带来了致命性负担，7天后存活鱼的数量出现下降。为提高存活率，我们尽一切努力避免其他损伤，包括缩短拍摄时间（控制在1分钟以内）以减轻斑马鱼的负担，但并未取得效果。后续可进一步开展研究，以找到提高存活率的方法。

有趣的是，斑马鱼的白内障在未接受治疗的情况下也确实有所改善。在斑马鱼实验的第一阶段，从第0天到第7天，非药物治疗组的灰度值平均上升了35.7。在第二阶段实验中，从第7天到第10天的观察期内，羊毛甾醇组和β-环糊精组的灰度值均上升了约10个单位。我们推测这种白内障消退效应可能与斑马鱼的某些恢复基因有关：多项研究已证实斑马鱼具有出色的疾病自愈能力，斑马鱼甚至能够再生视网膜等功能性神经组织。重伤后。 考虑到其自我修复能力活体斑马鱼的生存能力，我们可能高估了羊毛甾醇和β-环糊精对白内障形成的影响。为避免这一情况，我们纳入了未处理组的数据作为对照。处理组与未处理组之间观察到的差异，可能已将 的自我修复能力影响降至最低斑马鱼，它们提供了关于羊毛甾醇和β-环糊精真实作用的信息（图1C）。因此，出于筛选目的，该方法或许能够快速确定候选化合物的作用，且可能对进一步的探索具有实用价值。这种清除白内障能力的机制也应作为白内障的一种潜在治疗方法进行深入研究。

猪和斑马鱼的白内障均被诱导至3级，但我们采用更严格的标准来界定斑马鱼的白内障。猪晶状体白内障的严重程度仅通过视觉分级法确定¹⁰，因为该体外实验仅用于初步筛选有效化合物。相比之下，由于新型斑马鱼白内障模型是药物评估的主要筛选模型，只有经ImageQuant TL软件确认（灰度值＜150）的3级白内障斑马鱼晶状体才被纳入后续治疗实验。这可确保后续实验的一致性与可靠性。

白内障诱导后，体内（斑马鱼）和体外（猪）模型中的大多数白内障分别在治疗后第1天和第2天病情加重。对此的解释可能是，治疗化合物需要时间来发挥治疗作用，而UVC对晶状体结构的破坏仍在持续。此外，我们发现在体外实验中，随着温度升高，猪晶状体变得更透明，这可能是因为聚集的晶状体蛋白溶解度增加。我们注意到温度对晶状体蛋白的溶解度有显著影响，因此在整个实验过程中需对其进行严格监测。这也是我们将整个猪晶状体实验放在冰槽中进行以保持温度恒定的原因。

本研究存在若干局限性，包括样本量较小以及缺乏机制鉴定。然而，在当前的临床医疗实践中，仍没有有效的药物用于白内障的治疗。羊毛甾醇在人体临床应用中展现出巨大潜力。白内障的发生涉及多种因素，包括钙稳态失衡、基因突变、氧化应激以及紫外线暴露。这些因素可导致晶状体蛋白错误折叠并聚集，进而引发白内障。 羊毛甾醇被认为可以溶解聚集，从而恢复晶状体的透明度。然而，羊毛甾醇恢复晶状体透明度的确切机制尚未完全明确，该假设仍需通过更多基于分子层面的研究来验证。

综上所述，这种新型斑马鱼白内障模型非常经济，且能在短时间内分析大量样本。该模型已能够证明局部羊毛甾醇应用治疗白内障的有效性。在这些体内实验之前，通过体外浊度清除试验和离体猪晶状体实验，羊毛甾醇已被证实为有效化合物。该模型中的实验顺序表明，未来验证抗白内障化合物将具备可行性，且不会在动物使用方面产生重大伦理问题。这一新开发的斑马鱼白内障模型具有成本效益，未来将有助于更快地筛选抗白内障化合物。